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同型半胱氨酸对颈动脉*滑肌细胞增殖和氧化及基质金属蛋白酶-9表达的影响_论文

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? 32 8 ? 9   ? 论著 ?   同型 半胱 氨 酸 对 颈 动脉 *滑 肌 细胞 增 殖 和 氧化 及  基 质 金属 蛋 白酶 一 9表 达 的影 响  王立忠 ,尚 小明 ,李 燕  【 摘要 】 目的  观 察 同型半胱 氨酸 ( e )对 兔颈动 脉* 滑肌 细胞氧 化损 伤、增 殖,及对 基质 金属 蛋 白酶    Hy ( P 一 MM ) 9表 达 的 影 响 ,进 而 从 细胞 及 分 子 水 *探 讨 H y引起 动 脉 粥 样 硬 化 ( S 的 发 病 机 制 。 方 法 c A) 采 用不同剂   量 高蛋 氨 酸 饲料 饲喂 新 西 兰 大 白兔 ,用 H E染 色法观 察 颈 动 脉 增 生 。分 离 兔 颈 动 脉 * 滑 肌 用胰 消 化 酶 处 理 后 进 行 原 代  细胞及传代细胞培养 。用黄嘌呤氧化法比色测定细胞 内超氧化物歧化酶 ( O S D) 的活力。用可见光比 色法测定 细胞 内   过 氧化 氢 ( A ) 的活 力 。免 疫 印 迹 法检 测 MMP一 CT 9蛋 白的表 达 。用 反 转 录聚 合 酶链 式反 应 ( T—P R) 检 测 MM   R C P一 9m N 的表 达 。结 果  R A 光 镜 下 可 见 高蛋 氨 酸饮 食 组 局 部 颈 动脉 内膜 损 伤 , 内皮 细 胞 坏 死脱 落 . 中膜 * 滑 肌 细 胞 排 列   紊乱 ,内膜下可见泡沫细胞 。在高蛋氨酸饮食作用下,颈动脉* 滑肌细胞 内 C T O 的活力明显增 高;免疫印迹法  A 、S D 结果 显 示 ,随 着蛋 氨 酸含 量 的增 加 ,各 组 动 物 颈 动脉 * 滑 肌 细 胞 内 MMP一 9的蛋 白 量 亦逐 渐 增 高 , 差 异 有 统 计 学 意 义  ( 00 ) P< .5 。经 R P R扩增,高蛋氨酸饮食组 MM 9mR A表达量增加 。结论 T— C P一   N 进程加速。   高 Hy c 可加速动脉血管*滑肌细  胞的增殖 ,并可能在一定剂量 范围内造成动脉血管*滑肌细胞的超氧化损害增加 ,造成 MMP一 9高表达 ,使机体 A s的  【 关键词 】 同型半胱氨 酸;肌细胞,*滑肌 ;基质金属蛋 白酶 一 ;氧化损伤 ;动脉硬化    9 【 中图分类号】R534 【   .  文献标识码 】A 【 4   文章编号】10 97 (00 0 39 — 4 07— 52 2 1)1 — 28 0  同型半胱氨酸 ( c )属含硫氨基酸 ,是蛋氨酸代谢过程  Hy 中一个 重 要 的 中 间 产 物 … ,是 动 脉 粥 样 硬 化 ( te sl oi, a r ce s   ho r s 13 主要 方 法 和 步骤  . 13 1 实验 动物模型制备 .. 4 0只新西 兰兔 随机分为 5组 ,每  A )的一个新的 、重要 的独 立危 险因子 ,H y自身氧化 可引  s c 起内皮细胞损伤 ,同时亦 可影 响基质金 属蛋 白酶 一9 ( a i m tx r  e l pe ae 9,MMP一 ) 的 表 达 ,从 而 导 致 A t l ti s 一 ao n 9 S的发 生 。   组 8只 ,普通饲料适 应性 喂养 l ;第 一组 为对照组 ( o— 周 Cn   tl r ,C组 ) o ,饲 喂普通饲料不含蛋 氨酸 ;第 二组为 m d l oe 1组    ( 组) M1 ,饲 喂 含 2 蛋 氨 酸 、6 花 生 油 和 9 % 普 通 颗 粒 饲  % % 2 料 的 高 蛋 氨 酸 饲 料 ;第 三 组 为 m dl oe 2组 ( 2组 ) 饲 喂 含    M , 4 蛋 氨 酸 、6 花生 油 和 9 % 普通 颗粒 饲料 的 高 蛋 氨 酸 饲 料 ; % % 0   既往关于 H y A 机制 的研究 大都在离体血 管内皮细胞或离  c致 S 体 的*滑肌细胞株 上完成 ,所使 用的 H y的水*往 往高 出机  c 体 实际水*的数倍 或数十倍 。本研究 旨在探讨 H y对活体 动  c 物 ( )血 管 * 滑 肌 细 胞 ( S ) 的氧 化 、增 殖 ,及 对  兔 V MC M MP一 9表 达 的影 响 。   1 材 料 与 方 法  第 四组为 moe3组 ( 3组 ) dl   M ,饲喂含 6 %蛋氨酸 、6 %花生油  和 8 %普通颗 粒饲料 的高 蛋氨 酸饲料 ;第 五组 为 m dl 8 oe 4组    ( M4组) ,饲喂含 1%蛋氨酸 、6 0 %花生油和 8 %普通颗粒饲  4 料的高蛋 氨酸饲 料 ;饲喂 8周后 ,每 周抽取 静脉 血共采 血 5   11 实验动物及材料 . 外 医院 基础 所 。   实验对象 :新西 兰大 白兔购 自北京阜  次 ,分 别测 H y * 。喂养 3个月 至 颈 动 脉 粥样 硬 化 性狭 窄 模  c水 型建立。   13 2 兔 颈 动 脉 内膜 * 滑肌 分 离  喂 养 3个 月 新 西 兰 兔 手 术  .. 12 主要实验试剂  鼠抗兔 MMP一 . 9单克隆抗体 ,鼠源 G P  A. D H单克隆抗体美 国 SnaCu 公 司,S D试剂 盒 C T酶联 免  a t rz   O A 疫吸附测定试剂盒购 白天津生命科学研 究所 ,G P H引物 由 AD   上 海 闪 晶分 子 生 物 公 司 合 成 ,T q o m rs 自 Sg aP l eae购 y i ma公 司 ,   日 晨禁食水 ,称体质量 ,肌肉注射速眠新注射液 ( .  lk ) 0 1m/ g  麻 醉。取动物颈部正 中皮肤切 口,切开皮肤、皮下组织 ,正 中   剪开颈 阔肌 ,沿胸锁乳突肌 内侧缘 向深部游离显露颈 总动 脉。   以后在显微镜 下操作 ,剪开 动脉鞘 ,


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